ta克隆原理（ta克隆原理）

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1、ta克隆方法（originaltacloningkit）把pcr片断与一个具有3-t突出的载体dna连接起来的方法。

2、因为pcr反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3加上a。

3、例如：taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，pcr反应时在每条pcr扩增产物的3端自动添加一个3-a突出端。

4、只有用经过特殊处理的具有3-t突出末端的dna片断才能通过t/a配对进行连接。

5、　通过pcr的方法扩增目的基因片断的过程中，由于往往不清楚目的基因的dna序列，获得的目的片断通常需要通过ta克隆的方法，重组到t-载体中，通过序列测定清楚dna序列。

6、由于在pcr过程中，使用的dna聚合酶不同，往往分为2种情况：（1）使用不同的taq酶，在pcr扩增循环结束后，加上72℃10分钟一个过程，taq酶可以在扩增产物的3末端加上a，因此pcr产物回收纯化后可以和t载体直接连接。

7、（2）使用高保真的dna聚合酶，如pfu酶，由于其不能在扩增产物的3末端加上a，得到的dna序列为钝端，因此，需要在回收纯化后进行加a的过程，通常是以pcr回收产物为模板，加上一定量的普通taq酶和反应液，加入datp（或dntp），72℃10分钟，然后将加a产物直接用于ta连接。

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