多聚甲醛固定流式细胞（多聚甲醛固定细胞原理）

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1、细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长。

2、主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等。

3、细胞爬片的准备1盖玻片的选择：爬片可用一般的盖玻片，也可用专用细胞爬片（价格比较昂贵）但是细胞贴壁牢固，拍出照片效果好；2爬片的剪裁：可根据自己的需要，到染色时再将之切开，这样既保证了细胞均一性，又可同时做几个指标的染色剪裁成合适大小，置于6孔板、12孔板或24孔板；3爬片的使用前处理：将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了，如果不干净的话，细胞帖壁不好），放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒。

4、高压后取出放入烤箱中烤干，备用。

5、烤干后可放入超净台中。

6、4多聚赖氨酸的使用：很多人都将玻片用此处理，以使细胞与玻片结合更牢。

7、但我在做爬片时从来没用过多聚赖氨酸，细胞贴壁仍然很好，且在做后续的免疫细胞化学染色、TUNEL等凋亡检测、免疫荧光等也从未脱过片。

8、细胞爬片的操作1.胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。

9、2.加细胞前，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。

10、(整个过程注意无菌操作)3.根据自己的需要选择合适的细胞密度接入培养板内即可。

11、4.待细胞贴壁后，可去上清加含药培养基。

12、5.按照实验设计，作用一定时间后取玻片。

13、取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧，张力较大，一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以了。

14、如果要做诸如24h，48h，72h等这样时间点的实验的话，将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。

15、末取出的可接着继续培养。

16、细胞爬片的固定另外在保存细胞爬片的时候，一般用培养皿或板，先在皿底放一层面巾纸，然后再放爬片，这样方便做实验时取片。

17、细胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。

18、当然，有例外，比如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗，因为凋亡的细胞在洗的过程中有可能会脱落。

19、然后盖上盖子，并在盖子上做标记，为避免混淆，可用透明胶带将盖子和皿连在一起。

20、一般-20℃保存2-3个月的片子做免疫组化是没有问题的。

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